脂質(zhì)體(LR)試劑是陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTMA和DPE的混合物(1:1)。它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前條件下最方面的轉(zhuǎn)染方法之轉(zhuǎn)染率高，優(yōu)于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉(zhuǎn)染到各種細(xì)胞。用LR進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，首先需要優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，應(yīng)找出該批LR對(duì)轉(zhuǎn)染某一特定細(xì)胞適合的用量、作用時(shí)間等，對(duì)每批LR都要做，先要固定一個(gè)DNA的量和DNA/LR混合物與細(xì)胞相互作用的時(shí)間，DNA可從1-5ug和孵育時(shí)間6h,開(kāi)始按這兩個(gè)參數(shù)繪出相應(yīng)LR需用量的曲線(xiàn)，再選用LR和DNA兩者最佳的劑量，確定出轉(zhuǎn)染時(shí)間，因LR對(duì)細(xì)胞有一定的毒性，轉(zhuǎn)染時(shí)間以不超過(guò)24h為宜。
細(xì)胞種類(lèi)：C0-7、BHK、NIH-3T3、Hela和 Jurkat等任何一種細(xì)胞均可作為受體細(xì)胞。
一、操作步驟：
取6孔培養(yǎng)板，向每孔中加入2m1含(1-2)x105個(gè)細(xì)胞的培養(yǎng)基，37℃、18%C02培養(yǎng)基40%-60%匯合時(shí)。
2)轉(zhuǎn)染液制備：在聚苯y(tǒng)i烯管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染1個(gè)空細(xì)胞所用的A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋DNA使?jié)舛葹?-10ug,終量100u1。B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋LR,使終濃度為2-50ug,終量100u1輕輕混合A液、B液，室溫中置10-15min,稍后會(huì)岀現(xiàn)微濁現(xiàn)象，但并不妨礙轉(zhuǎn)染
3)轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用2m1不含血清培養(yǎng)基漂洗2次，再加入1m1不含血清培養(yǎng)基
4)轉(zhuǎn)染：把AB復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)基中，搖勻，置37℃溫箱中6-24h吸除無(wú)血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)
5)其余處理：如觀察、篩選、檢測(cè)等與其他轉(zhuǎn)染法相同
6)注意：轉(zhuǎn)染時(shí)切勿加血清，血清對(duì)轉(zhuǎn)染效率有很大影響。
二、脂質(zhì)體快速轉(zhuǎn)染法的操作步驟
1)將5 105個(gè)細(xì)胞/孔接種到6孔板中培養(yǎng)24h，使細(xì)胞達(dá)到50%-60%的板底面積。
2)在試管中制備DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物
1.1)在1m1無(wú)血清DMEM中稀釋PSV1-新質(zhì)粒DNA或供體DNA
1.2)旋轉(zhuǎn)1s，然后加入脂質(zhì)體混懸液，旋轉(zhuǎn)。
1.3)室溫放置5-10分鐘，使DNA與脂質(zhì)體結(jié)合。
3.棄去細(xì)胞內(nèi)的舊液，用1m1無(wú)血清DMEM洗滌細(xì)胞一次，然后棄去細(xì)胞，直接向每個(gè)孔中加入1 m1脫氧核糖核酸-脂質(zhì)體復(fù)合物，在37培養(yǎng)3-5天，然后向每個(gè)孔中加入含20%胎牛血清的DMEM，繼續(xù)培養(yǎng)14-24小時(shí)。吸出脫氧核糖核酸脂質(zhì)體混合物，加入含10%胎牛血清的新鮮DMEM，2m1/l，培養(yǎng)24-48h。通過(guò)細(xì)胞刮取或消化收集細(xì)胞用于分析和鑒定.
三、穩(wěn)定的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法：
1)接種的細(xì)胞與上述相同，細(xì)胞生長(zhǎng)到50%
2)DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物轉(zhuǎn)染細(xì)胞的制備同上。
3)向每個(gè)孔中加入1m1含20%胎牛血清的DMEM，在37培養(yǎng)48h。
4)吸出DEM，用G418選擇性培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞，讓細(xì)胞生長(zhǎng)一定時(shí)間，篩選轉(zhuǎn)染克隆。該方法按照細(xì)胞克隆篩選方法進(jìn)行。
